作者：刘凤霞; 李京一; 王志刚; 徐凌飞流式细胞仪细胞核解离液dna含量梨组培苗
摘要：适宜的缓冲液是制备植物完整细胞核的关键。为了筛选提取梨（Pyrus）细胞核的适宜缓冲液,本实验以新疆库尔勒香梨（Pyrus sinkiangensis）组培苗叶片为材料,用剪切法提取细胞核,综合分析五种解离液（通用缓冲液（general purpose buffer,GPB）、木本植物缓冲液（woody plant buffer,WPB）、Otto＇s Buffer（OTTO）、加尔布雷思缓冲液（Galbraith＇s buffer,Galbraith＇s）和改良猕猴桃解离液（N-（2-hydroxyethy1）piperazine-N＇-（2-ethanesulfonic acid）,4-羟乙基哌嗪乙磺酸,HEPES））制备的悬浮液细胞核形态特征、DNA相对含量和细胞核提取效率。结果显示：相比WPB、Galbraith＇s和HEPES这3种解离液,GPB和OTTO提取的细胞核悬浮液有较多碎片和杂质,以至于影响流式图峰值的形成;WPB、Galbraith＇s和HEPES这3种解离液提取的细胞核悬浮液虽然在G0/G1期均形成了呈正态分布的、变异系数小于5%的DNA相对含量直方图,但是这3种解离液中只有WPB和Galbraith＇s在G2/M期也形成了DNA峰;另外,从提取细胞核的效率上来看,Galbraith＇s解离液提取细胞核的效率高于WPB解离液。本实验筛选Galbraith＇s解离液为提取梨细胞核的适宜缓冲液,为后续进一步开展植物细胞学和分子生物学相关研究奠定了基础。
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