作者：廖丫丫; 林德凤; 张子霄; 张越; 董妍; 芮...猪卵母细胞第一次减数分裂纺锤体染色体
摘要：保罗样激酶1（polo-like kinase 1,Plk1）在有丝分裂过程中扮演多种角色,对于中心体复制和分离、纺锤体组装及染色体分离等事件具有重要的调节作用。但目前对其在卵细胞减数分裂过程中的表达与功能仍知之甚少。本实验旨在探究猪（Sus scrofa）卵母细胞第一次减数分裂过程中Plk1的动态表达及其对第一次减数分裂中期（metaphaseⅠ,MⅠ）纺锤体组装的影响。首先,通过间接免疫荧光方法结合激光共聚焦显微成像技术检测了Plk1的动态表达及亚细胞定位,在此基础之上,采用Plk1特异性抑制剂GSK461364抑制实验,研究了Plk1抑制对猪卵母细胞成熟及MⅠ期染色体排列与纺锤体结构的影响。结果表明,在生发泡破裂期（germinal vesicle breakdown,GVBD）、MⅠ期和第一次减数分裂后末期（anaphase I and telophase I,ATI）Plk1均有表达,并且与α微管蛋白（α-tubulin）的亚细胞定位非常相似;采用Plk1特异性抑制剂GSK461364处理后,卵母细胞的第一极体排出率呈抑制剂浓度依赖性下降,当GSK461364浓度达0.3μmol/L时,第一极体排出率极显著下降（39.37±5.46）%vs（81.10±7.69）%（P〈0.01）,并伴随着染色体排列的紊乱;进一步通过激光共聚焦显微成像技术检测发现,Plk1特异性抑制后,卵母细胞纺锤体结构异常的比例极其显著升高（P〈0.001）。本研究结果表明,在猪卵母细胞第一次减数分裂过程中,Plk1的亚细胞定位与α-tubulin密切相关,对于MⅠ纺锤体组装具有重要的调节作用。本研究为深入了解卵母细胞减数分裂的调节机制、进一步提高猪卵母细胞体外成熟效率提供了实验参考。
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