作者：林裕胜; 江锦秀; 张靖鹏; 游伟; 胡奇林丝状支原体山羊亚种sybr检测方法
摘要：丝状支原体山羊亚种（Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc）可以引起羊支原体性肺炎（Mycoplasma pneumonia of goats and sheep,MPGS）。现有的方法费时、不能定量,不利于Mmc的准确快速检测。为建立检测Mmc的SYBR Green I qRT-PCR方法,本研究基于Mmc的MLC1770基因（hypothetical protein gene）序列进行特异性引物设计,用构建的Mmc-1770重组质粒为阳性标准品建立标准曲线,进行了该方法的特异性、灵敏性和重复实验。结果显示：标准曲线相关系数R2为0.999,扩增效率是101.3%;该方法对山羊支原体山羊肺炎亚种（Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp）、绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipenumoniae,Mo）、巴氏杆菌（Pasteurell amultocida,Pm）、大肠杆菌（Escherichia coli,Ec）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）及羊传染性脓疱毒（Orf virus,ORFV）均无交叉反应;最低检测限为226拷贝/μL,比常规PCR高100倍;组内变异系数为0.54%0.79%,组间变异系数为0.70%0.96%;对临床95份疑似MPGS样品进行检测,阳性率为11.6%（11/95）。实验结果证明该方法特异性强、敏感性高、重复性好,适合于临床样品中Mmc的快速准确检测。
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