作者：张永江; 黄洁芳; 王溪桥; 周慧; 李晓宇; ...检测鉴定特异性灵敏度
摘要：马铃薯（Solanum tuberosum）为世界重要农作物之一,受马铃薯S病毒（Potato virus S,PVS）侵染会导致其品质下降,产量降低;灵敏准确的检测技术将有助于提高PVS的检出率,进而防止其传播扩散危害马铃薯生产,保护马铃薯产业发展。为了建立PVS灵敏准确的检测技术,本研究根据其外壳蛋白（coat protein,CP）基因保守序列设计了微滴数字PCR（droplet digital PCR,ddPCR）的引物探针,并进行了特异性、灵敏度及重复性验证。结果表明,所建立的方法对PVS具有良好的特异性,能够有效区分对照病毒马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX）、马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）和烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）,与传统qRT-PCR结果一致;检测灵敏度可达20拷贝/μL的RNA,比qRT-PCR灵敏度高10倍;3次重复实验微滴数的标准误差小于总微滴数的1.5%,表明所建立的ddPCR方法具有良好的重复性。本研究建立的ddPCR方法可用于PVS的准确检测,也为其他植物病毒的准确检测提供了借鉴。
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