作者：金荣愉; 崔海峰; 俞晓平; 叶子弘质粒标准分子稳定性均匀性转基因生物生物计量
摘要：质粒标准分子是指含有外源基因和内源标准基因特异性片段的重组质粒分子。为缓解转基因检测用标准品严重缺乏的现状，本研究通过分析转基因作物的分子特征，选取启动子花椰菜花叶病毒的35S启动子（CaMV35S）、农杆菌Ti质粒胭脂碱合酶基因的终止子（NOS）、新霉素磷酸转移酶标记基因（NPTⅡ）、水稻蔗糖磷酸合酶内标基因（SPS）、棉花纤维特异的酰基载体蛋白内标基IN（fsACP）及编码苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白CrylAb的抗虫基IN（crylAb）作为靶标序列，并克隆到pEASY-T3载体上，构建包含6个基因元件的质粒标准分子。经PCR鉴定、酶切、测序等验证标准分子构建的正确性，对其重复性、均匀性、均一性、稳定性及定量方法进行系统研究。结果表明，针对质粒的3种定量方法中，数字PCR的准确度最高，PicoGreen法次之，紫外分光光度法的精确度较差；所建质粒的均匀性、重复性、稳定性均十分良好，合成不确定度均在2．8l％以下，符合标准物质候选物的要求；所建质粒可在低温条件下保存1个月以上，不宜高温（大于20℃）保存或运输。本研究所建标准分子可用于检测含crylAb、35S、NOS和NPTⅡ的转基因材料，亦可用于定量转基因水稻及转基因棉花的转基因成分含量。本研究的质粒构建、制备和正确性验证方法可为转基因检测用质粒标准分子的研制提供参照；重复性、均匀性、均一性、稳定性及定量方法等的分析结果可为质粒标准分子的性状分析、保存环境等的相关研究或申报国家标准物质提供实验依据。
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