作者：高星; 马洋洋; 成德; 马晓玲; 王华岩猪嵌合胚胎piggybac转座子孤雌胚胎
摘要：猪诱导多能干细胞（iPS）具有自我更新和多向分化潜能，是医学和细胞生物学研究理想的材料。为了探索猪iPS细胞的胚胎嵌合能力，本实验采用piggyBac转座子系统PB[Act-RFP]DS和Act-PBase载体，共转染猪iPS细胞，获得带有红色荧光标记的猪iPS细胞株PS24-R。并通过显微注射方法，将供体细胞PS24-R注入到4～8细胞期的胚胎腔隙，制备嵌合胚胎，待其继续发育至囊胚阶段，统计PS24-R细胞在胚胎中的嵌合情况。结果显示，通过转座子系统piggyBac标记的猪PS24-R细胞能够稳定表达红色荧光，以其作为供体细胞制备猪嵌合胚胎能够有效观察iPS细胞在胚胎中的嵌合情况。将1、5和10个猪PS24-R细胞和1个猪PS24．R细胞团分别注射到猪胚胎中构建嵌合胚胎，随着猪iPS细胞注射数量的增加，注射胚胎的囊胚率逐渐下降，但嵌合比例逐渐升高。同时与孤雌胚胎相比，嵌合胚胎中多能基因OCT4、SOX2和？CANOG表达显著提高。由此可见，采用piggyBac转座子标记的猪PS24-R细胞能够在猪早期胚胎发育阶段实现嵌合，为iPS细胞嵌合猪的生产提供了基础资料。
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