作者:雷江丽; 王丹; 吴燕民; 刘水; 吕慧中华结缕草农杆菌浸种法遗传转化
摘要:以中华结缕草(Zoysia sinica Hance)萌动种子为转化受体,利用新霉素磷酸转移酶基因(neomycinphos photransferaseⅡ,nptⅡ)作为筛选基因,对影响根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的遗传转化外部因素进行了实验,通过优化转化条件,建立了农杆菌浸种途径介导的中华结缕草遗传转化体系。结果表明,利用催芽6-7d的种子,加入OD600为0.9的农杆菌浸染菌液(在浸染菌液中添加100μmol/L乙酰丁香酮),附加5min抽真空并在迅速恢复常压后再抽真空30s的处理,振荡浸染48h,共培养3d后用75mg/L卡那霉素筛选能够获得较好的转化效果。通过对卡那霉素抗性苗进行PCR检测和GUS组织化学染色,初步验证nptⅡ和β-葡萄糖苷酶基因(β-glucuronidase,gus)已经整合进植物基因组,阳性转化率为55.21%。
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