作者：曹三杰; 邓飞; 杨恒; 黄小波; 文心田双顺反子载体构建红色荧光蛋白绿色荧光蛋白
摘要：为了构建由双CMV启动子调控的真核双顺反子表达载体pcDNA3.1AB,首先在pcDNA3.1（＋）的基础上,构建出pcDNA3.1A和pcDNA3.1B,然后通过PCR方法扩增pcDNA3.1A上含PCMV-MCS-BGHpolyA表达单元的片段,再定向克隆入pcDNA3.1B,最后得到载体pcDNA3.1AB。将DsRed与EGFP基因插入pcDNA3.1AB,分别构建pcDNA-DsRed、pcD-NA-EGFP和pcDNA-DsRed-EGFP真核表达质粒,并转染COS-7细胞瞬时表达。用荧光显微镜进行检测,结果表明,双价质粒pcDNA-DsRed-EGFP能同时表达红色和绿色荧光蛋白基因,两基因表达强度无显著差异,且双价与单价质粒相比荧光蛋白表达强度相当。
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