作者：邓丽瑜; 余少文; 邢苗; 张煜; 刘刚里氏木霉催化结构域基因重构毕赤酵母
摘要：通过两种增加催化结构域基因的方式对里氏木霉（Trichoderma reesei）QM9414外切型葡聚糖酶Ⅱ（CBHⅡ）编码基因（cbh2）进行重构。第一种重构方式是在cbh2基因的上游增加内切葡聚糖酶Ⅳ（EGⅣ）的催化结构域基因（cdE）,第二种重构方式是在纤维素酶CBHⅡ编码基因的下游增加其自身的cdC基因。通过PCR和基因重构手段获得重组质粒pPICZαA-cdE-cbh2和pPICZαA-cbh2-cdC,并在毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115中表达,获得重组菌株P.pastorisPEC11和PCC16,在经改良的摇瓶培养条件下能表达具有较高CMCNa（sodium carboxymethyl cellulose）酶活性的融合蛋白,培养液的CMCNa活性分别达到3.87和7.66U/mL,其中P.pastoris PCC16表达的重构酶活性是毕赤酵母表达的单一CBHⅡ酶活性的2倍。表明采用增加结构域的方式可以有效地提高纤维素酶的活性。
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