作者：张石柱; 王中康; 彭国雄; 曹月青; 殷幼平...绿僵菌产孢基因全长文库均一化技术switchingmechanismatofrna
摘要：为高效获得与绿僵菌产孢相关的全长cDNA,采用DSN（duplex-specific nuclease）均一化技术与SMART^TM（switching mechanism at 5′end of RNA transcript）建库技术相结合的方法,构建了杀虫真菌金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae var.acridum）菌株CQMa102产孢时期的均一化全长cDNA文库。经检测,原始文库滴度为2.1×10^6cfu/mL,库容量超过6×10^6。随机挑取100个克隆,PCR方法测得文库重组率大于95%,插入片段平均长度1500bp。小规模测序分析表明,全长基因的比例超过60%。对组成性表达基因3-磷酸甘油醛脱氢酶G3PDH和微管蛋白β-tubulin均一化前后丰度检测表明,其丰度均有大幅度的下降,基本满足节约筛库的要求。
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