作者：陈飒; 李金耀; 吴平; 孙寰; 赵丽梅; 寿惠...大豆叶绿体转化表达载体gfp
摘要：为解决杂交大豆（Glycine max）制种过程中不育系易与保持系混杂的问题，开展了大豆叶绿体转基因的研究。通过转基因方法在不育系的细胞质中植入筛选标记基因，以区分不育系和保持系。根据已发表的大豆叶绿体序列（GenBank X07675）设计引物，用PCR方法获得两段大豆叶绿体同源重组序列LHRR和RHRR，克隆到质粒pUC19中，并将来源于质粒pTF102的壮观霉素抗性基因aadA克隆到两段同源重组序列之间，以构建大豆叶绿体转化表达载体pJY01。aadA基因的启动子Prm和终止子psbA基因3’序列，分别从烟草叶绿体基因组中扩增而来。在此基础上，将草丁膦抗性基因或绿色荧光蛋白与GUS的融合蛋白基因克隆到该载体上，得到pJY03与pJY04，并初步应用于烟草（Nicotiana tobacum）的叶绿体转化，获得了具壮观霉素抗性的绿色愈伤和幼苗，PCR扩增出aadA基因的条带，并在激光共聚焦扫描下检测到GFP的表达。
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