作者:郭余龙; 鲁秀敏; 祝钦泷; 李名扬; 裴炎胚性愈伤组织转基因植株基因枪法转化棉花基因枪轰击法pcr扩增gus基因基因枪转化质粒dna外源基因评价指标瞬时表达peg法碱裂解法卡那霉素gus试剂盒启动子提取导入玉米选优
摘要:以川棉(Gossypium hirsutum)239胚性愈伤组织为受体,用基因枪轰击法导入外源基因,获得了经GUS组织染色和PCR扩增鉴定的转基因植株.以gus基因瞬时表达蓝点数为评价指标,考察了影响基因枪转化棉花胚性愈伤组织的几个因素,结果表明:使用碱裂解法提取和PEG法纯化的质粒DNA,优于试剂盒大量提取的DNA;当轰击压力为10.7 MPa时,轰击距离6或9 cm较好;轰前经1~2周培养的愈伤组织较佳.实验还表明,玉米的Ubi启动子在棉花胚性愈伤组织中有启动活性.轰击后直接用100 mg/L的卡那霉素进行筛选优于梯度筛选.
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