作者：梁革梅; 徐广; 王桂荣; 吴孔明; 郭予元apn活性受体蛋白中分子处理改变中肠棉铃虫bt毒素抗性
摘要：利用Mg/EGTA方法,以不同的速度进行离心,成功地分离了棉铃虫(Bacillus thuringiensis)中肠刷状缘膜囊泡(BBMV0,BBMV中保留了大部分氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)活性,BBMV中APN的特异活性较粗匀浆液相比提高了3.29倍;CHAPS3-[(3-chlor-amidopropyl)dimethylammonio]-1-propane sulphonate可以增加BBMV的溶解,加入1%(CHAPS)之后APN特异活性增加至5.21倍;利用磷酸酰肌醇特异性的磷脂酶(PI-PLC)能将APN从膜上解离下来,BBMV经PI-PLC处理后,SDS-PAGE电泳结果仅有120 kD的1条带;Mono-Q和FPLC结合的方法可以纯化部分APN,SDS-PAGE电泳结果显示,经Mono-Q柱处理后的BBMV中分子量约100 kD的蛋白条带加粗;棉铃虫3个抗性品系与敏感品系相比,APN特异活性差异不显著,说明棉铃虫对Bt产生抗性与APN活性的变化无关,抗性的产生可能与Bt毒素和APN结合能力的改变有关.
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