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柿属植物ISSR分析技术的建立

作者:张青林; 罗正荣issr分析引物植物遗传多样性技术体系taqdna聚合酶琼脂糖电泳扩增

摘要:以部分柿属(Diospyros)植物为材料,对ISSR-PCR反应体系的Mg^2、dNTPs、引物、模板DNA和Taq DNA聚合酶浓度,退火温度及扩增循环次数进行了探讨,确立了适合柿属植物ISSR分析技术体系:在25μL反应体系中,含l×Buffer,Mg^2+2.0或2.5mmol/L,dNTPs 0.2mmol/L,引物0.6μmol/L,TaqDNA聚合酶1U,甲酰胺2%,模板DNA 2.4ng/μL;PCR扩增程序:94℃变性3min;94℃ 30s,(Tm+2)℃(根据引物不同设定)45s,72℃ 1.5min,35个循环;72℃延伸7min;2%琼脂糖电泳分离PCR产物。结果为柿属植物遗传多样性和分子系统学研究提供技术支持。

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农业生物技术学报

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