作者：刘卫卫; 白欣立; 李震中; 张军峰; 李鑫; ...空肠弯曲菌真核表达重组载体
摘要：目的以空肠弯曲菌（CJ）细胞扩张毒素（cytolethal distending toxi,CDT）cdtA、cdtB及cdtC为目的基因,构建CJ-cdtA、cdtB及cdtC基因的真核表达重组载体pcDNA3.1（＋）-cdtA,pcDNA3.1（＋）-cdtB,pcDNA3.1（＋）-cdtC,为CJ核酸疫苗的研制提供实验材料。方法用Primer5.0软件分析GenBank中空肠弯曲菌细胞扩张毒素cdtA、cdtB及cdtC基因序列,设计合成相应特异性引物,引入EcoRI、BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,PCR扩增cdtA、cdtB及cdtC目的基因片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1（＋）多克隆酶切位点中,构建重组体pcDNA3.1（＋）-cdtA、pcDNA3.1（＋）-cdtB及pcDNA3.1（＋）-cdtC;通过酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定,筛选阳性重组体。结果扩增出特异的cdtA、cdtB及cdtC基因片段,大小约为807bp、798bp、570bp;双酶切及测序鉴定证明成功构建了CJ真核表达重组载体pcDNA3.1（＋）-cdtA、pcDNA3.1（＋）-cdtB及pcDNA3.1（＋）-cdtC。结论 PCR扩增得到了大小约为807bp、798bp、570bp的CJ-cdtA、cdtB及cdtC目的基因片段;并成功构建了pcDNA3.1（＋）-cdtA、cdtB及cdtC真核表达重组载体。
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