作者：张武; 丁洋; 李立强; 李明皓慢病毒表达载体和可诱导载体诱导表达
摘要：目的构建大鼠FcγRIIb慢病毒诱导表达载体,表达病毒与调节病毒共同感染大鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs)并检测FcγRIIb的表达。方法提取大鼠肝脏mRNA,并以其为模板通过逆转录及PCR获得FcγRIIb基因片段,利用酶切重连技术构建慢病毒表达载体TRE与FcγRIIb重组慢病毒载体。使用HEK293T细胞分别包装TRE-FcγRIIb表达病毒与TET-on调节病毒,并检测其病毒滴度;离体诱导培养大鼠骨髓来源未成熟树突状细胞并鉴定。采用OX-62免疫磁珠分选大鼠骨髓来源未成熟树突状细胞(iDC),用表达病毒和可诱导病毒共感染iDC。经一定梯度的强力霉素(DOX)诱导,分别用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印记法(WB)检测BMDC中FcγRIIb mRNA水平及FcγRIIb蛋白表达水平;免疫荧光检测树突状细胞中FcγRIIb的表达;电镜对分离培养的BMDC进行形态学观察和鉴定。结果成功构建TRE-FcγRIIb重组慢病毒载体,经酶切、PCR电泳条带鉴定成功,基因序列测定结果与GenBank比对同源性100%。体外诱导培养BMDC,5d左右观察到明显的树突样凸起。成功用慢病毒感染BMDC后,FcγRIIb mRNA和FcγRIIb蛋白水平均较未感染BMDC有明显的增高。结论成功制备了含大鼠FcγRIIb基因慢病毒,用其感染未成熟树突状细胞并经DOX诱导可实现FcγRIIb的高表达。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
