作者：石艳春 韩堃 郑源强 吴岩 毕力夫羊布鲁氏菌omp25原核表达载体克隆鉴定
摘要：目的：利用PCR反应从羊布鲁氏菌基因组DNA中克隆omp25基因,并将其构建到原核表达载体pET -32a中.方法：试剂盒法提取羊布鲁氏菌基因组DNA,设计合适的引物,通过PCR反应从基因组中扩增外膜蛋白OMP25的编码基因（omp25）.将得到的基因片段连接到克隆载体pMD19 -T的多克隆位点（MCS）中,将连接体pMD19 -T - omp25转化感受态大肠杆菌DH5（并进行筛选和克隆扩增,提取质粒并进行酶切分析与序列测定.利用酶切与连接反应将目的基因（ omp25）插入载体pET -32a的多克隆位点中,将连接体pET -32a -omp25转化感受态大肠杆菌DH5（并进行筛选和克隆扩增,提取质粒并进行酶切分析.结果：PCR扩增得到的基因片段与GenBank中已公布的羊布鲁氏菌omp25基因同源性为99％.酶切分析结果表明,omp25基因成功地插入载体pET -32a中.结论：成功地扩增得到了羊布鲁氏菌omp25基因并构建了携带该基因的重组原核表达载体pET-32a-omp25,为后续的研究提供了可靠的基础.
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