作者：郑其升; 杨松; 徐学清; 曹瑞兵; 陈德胜; ...日本脑炎病毒囊膜蛋白克隆原核表达
摘要：根据GenBank公布的日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14-2减毒株的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出编码JEV囊膜蛋白抗原域Ⅲ的基因(EⅢ),将其连接入pMD18-T载体,经测序后克隆入原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达载体pET-EⅢ.阳性质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,JEV- EⅢ基因获得表达,经细胞定位分析,目的蛋白以包涵体的形式存在于大肠杆菌中.通过改变IPTG的浓度和诱导时间,确定了表达EⅢ蛋白的最佳诱导条件:IPTG终浓度为0.1 mmol·L1,诱导时间为3 h.在大肠杆菌中的最高表达量占菌体总蛋白的54.9%.Western-blot分析表明表达产物具有良好的免疫学活性.利用纯化的表达产物作抗原包被酶标板,可以明显地区分JEV阴、阳性血清,并且不与猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒、猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒的阳性血清发生反应.结论:重组JEV EⅢ蛋白可以用于检测猪血清中JEV抗体水平.
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