可视化环介导等温扩增技术检测Phytophthora tentaculata

作者：戴婷婷 康振烨 吴小芹phytophthoratentaculata环介导等温扩增ptypt1

摘要：为了能在植物发病早期快速、准确地鉴定出Phytophthora tentaculata引起的疫病,控制疫病的传播和流行,减少其造成的经济损失,笔者以Ypt1基因为靶序列应用环介导等温核酸扩增技术（loop-mediated isothermal am-plification,LAMP）,建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的P.tentaculata检测方法。结果表明：在等温条件下（64℃）进行核酸扩增反应80 min,反应后经2%琼脂糖凝胶电泳和扩增前加入染料HNB（羟基萘酚蓝）作为反应指示剂验证扩增结果,在特异性实验中,P.tentaculata菌株能够扩增到梯形状的条带,同时HNB显色观察到天蓝色的阳性反应,而从其他疫霉、腐霉和真菌供试菌株中均没有观察到这些现象。在灵敏度试验中,PtYpt1-LAMP技术最低检测限为1 ng/μL。

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