作者：徐文明; 林建聪; 陈美姬; 张常然; 李延兵内质网应激相互作用人脐静脉内皮细胞高糖
摘要：目的糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）与内质网应激（ERS）相互作用是否参与高糖引起的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤。方法应用40 mmol/L葡萄糖作用HUVECs 24 h构建高糖血管内皮细胞损伤模型。应用Western blot法检测GSK-3β、糖调节蛋白78（GRP78）、CHOP和cleaved caspase-3蛋白的表达水平;CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法测定细胞凋亡;DCFH-DA染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧（ROS）水平;罗丹明123（Rh123）染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位（MMP）。结果应用40 mmol/L葡萄糖处理HUVECs 3-24 h,磷酸化（p）-GSK-3β表达减少,与Con组比较,差异具有统计学意义（P〈0.05）;用高糖处理HUVECs 1-24 h,对促进GRP78和CHOP蛋白表达呈显著的时间依赖性,与Con组比较,差异具有统计学意义（P〈0.05）;氯化锂（Li Cl,GSK-3β抑制剂）能减轻高糖引起的ERS,使GRP78和CHOP蛋白表达减少,与高糖组比较,差异具有统计学意义（P〈0.01）;4-苯基丁酸（4-PBA,ERS抑制剂）减弱高糖对GSK-3β的激活作用,使p-GSK-3β表达增多,与高糖组比较,差异具有统计学意义（P〈0.01）。高糖处理HUVECs 24 h能引起细胞存活率降低、凋亡细胞、cleaved caspase-3表达和ROS生成增多及MMP丢失等损伤;在高糖作用前,应用Li Cl或4-PBA预处理60 min均减轻高糖引起的上述损伤,与高糖组分别比较,差异均具有统计学意义（P〈0.01）。结论在高糖损伤的HUVECs,存在GSK-3β与ERS的相互作用并参与高糖对HUVECs的损伤。
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