作者：杜婵娟; 付岗; 叶云峰; 杨迪; 张晋; 潘连...哈茨木霉原生质体绿色荧光蛋白标记技术
摘要：【目的】优化拮抗木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件，快速、高效获得绿色荧光标记菌株，为哈茨木霉及同类真菌的GFP标记提供参考，并为下一步研究其在不同环境中的定殖动态、分布规律及生防特性等打下基础。【方法】采用PEG-CaCl2介导的原生质体转化体系，从木霉菌株的菌龄、酶解时间、转化体系中质粒的含量及再生培养基中潮霉素B（HmB）的浓度等方面对哈茨木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件进行优化，获得表达稳定的转化子，并与出发菌株的生长特性进行比较，评价转化效果。【结果】gz-2菌株培养36h菌丝所形成的原生质体稳定性最好，菌丝体酶解3.5h获得的原生质体数量最多，达11.67×106个/mL；每240μL转化体系中质粒DNA含量为40μL，得到的转化子数量最多，为8.67个/皿；再生培养基中HmB含量为600μg/mL时可获得稳定的强转化子。【结论】筛选获得1株表达稳定的转化子GFP-gz-2菌株，该菌株在菌落形态、菌丝生长速率及产孢量上与出发菌株gz-2无显著差异，且具有较好的遗传稳定性。
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