作者：谢志勤; 谢芝勋; 邓显文; 谢丽基; 范晴; ...检测
摘要：【目的】建立一次性可同时扩增鉴别鸡新城疫病毒（NDV）和禽肺炎病毒（APV）的二重RT-PCR，为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供技术支持。【方法】根据GenBank已发表NDV的F基因序列（GenBank登录号JX840454）和APV的F基因序列（GeneBank登录号AF187154）分别设计2对特异性引物，应用这2对引物建立可同时检测鉴别NDV和APV的二重RT-PCR，对扩增条件进行优化，并通过特异性试验、敏感性试验和临床样品检测等验证其实用性。【结果】优化后的二重RT-PCR可特异性扩增出参试NDV毒株（LaSota株、F48E9株、I株）及APV/MN-10毒株的目的条带，其大小分别为247和424 bp，而其他对照参试毒株在247和424 bp处均无特异条带出现。二重RT-PCR针对NDV和APV的最低检出限均为10 pg的RNA。应用建立的二重RT-PCR对132份从广西采集的病鸡样品进行检测，结果得到NDV阳性样品26份、APV阳性样品2份，与血清学方法的鉴定结果一致。随机选取的2份NDV阳性PCR产物与NDV（GenBank登录号JX840454）的F基因序列一致，同源性达100%；2份APV阳性PCR产物与APV（GenBank登录号AF187154）的F基因序列也完全一致，同源性达100%。【结论】针对NDV和APV建立的二重RT-PCR具有特异性好、灵敏度高、简便快速的特点，可用于临床快速鉴别诊断，为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供了技术支持。
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