作者：夏敏; 杨晓岚; 杨鹏辉; 王希良ag85bmrna疫苗序列设计免疫评价
摘要：目的体外转录结核分枝杆菌Ag85B-mRNA并评价其免疫原性。方法结合密码子偏好性、GC含量和mRNA二级结构的自由能,优化Ag85B编码区序列,并在其两端插入β球蛋白3’和5’UTR序列。合成目的序列,进行体外转录。经琼脂糖凝胶电泳鉴定正确,体外转染细胞验证其表达后,联合鱼精蛋白免疫Balb/c小鼠,检测特异性细胞免疫应答。结果 Ag85B优化序列二级结构分析显示,其具有更高的稳定性。成功体外合成稳定的Ag85B-mRNA。Western blot检测Ag85B-mRNA转染293T细胞24、48 h,均有清晰特异性的目的蛋白条带。小鼠免疫试验结果显示,Ag85B-mRNA可诱导针对结核分枝杆菌Ag85B分泌高水平IFN-γ的Th1型免疫应答。结论成功体外合成稳定的Ag85B-mRNA疫苗,具有较好的免疫原性,为新型结核疫苗的研制提供新思路。
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