作者：马杰 赵卫东 张丽娜 周虎 丁玉兰 宣恒华 ...自然杀伤细胞扩增饲养细胞刺激因子组合免疫治疗
摘要：目的探讨不同刺激因子组合对人自然杀伤细胞（NK细胞）体外扩增及其功能的影响。方法 VarioMACS分选健康成人外周血单个核细胞（PBMC）中的NK细胞,依据添加刺激因子的不同分为A组（IL-2）、B组（IL-2＋IL-15）、C组（IL-2＋IL-15＋饲养细胞）,饲养细胞为30 Gyγ射线照射后的同种异体外周血单个核细胞（allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs）,未添加任何刺激因子的细胞的作为对照组,在干细胞生长培养基（SCGM）中进行培养扩增14 d,第1天添加PHA及OKT3,第5天离心洗去;台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测分选及扩增前后CD56＋CD3-NK细胞纯度;改良的MTT法检测NK细胞对K562、HO8910及PBMC的杀伤活性。结果经VarioMACS免疫磁珠阴性分选后NK细胞纯度由分选前的（9.2±2.9）%提高到（93.5±3.2）%,培养14 d后,除对照组NK细胞纯度降低外,其余组与扩增前无明显差异（P〉0.05）。细胞扩增倍数分别为17.2±1.7、51.3±6.6和82.4±9.8倍,均显著高于对照组（5.7±1.2）（P〈0.01）。实验组组间比较,C组明显高于A组和B组（P〈0.01）。细胞杀伤实验表明,当效靶比为10∶1时,各组的杀伤活性显示为C组〉B组〉A组〉对照组,C组扩增的NK细胞对K562及HO8910的杀伤率可分别达到（70.1±8.9）%和（64.6±6.2）%,显著高于对照组、A组（P〈0.01）和B组（P〈0.05）,对PBMC的杀伤率仅为（4.2±1.2）%。结论经VarioMACS分选获得的NK细胞,在体外使用SCGM培养基培养,添加IL-2、IL-15和照射后AlloMNCs作为刺激因子,可获得高效扩增和有效活化的NK细胞,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增高纯度NK细胞的方法。
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