作者：马杰 赵卫东 周虎 张丽娜 丁玉兰 宣恒华 ...自然杀伤细胞扩增饲养细胞照射后的allomncs免疫治疗
摘要：目的探讨照射后的同种异体外周血单个核细胞（allogeneic PB-MNCs,AlloMNCs）对人自然杀伤细胞（NK）体外扩增的影响,为NK细胞的过继免疫治疗奠定基础。方法 Ficoll密度梯度离心法分离健康成人外周血单个核细胞（PBMCs）,30、50和70 Gyγ射线照射后的AlloMNCs作为饲养细胞,分别加入上述PBMCs,在添加细胞因子的X-VIVO15TM无血清培养基中进行培养扩增,同时选择未添加饲养细胞的作为对照组;台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测CD56＋CD3-NK细胞纯度;MTT法检测细胞杀伤活性。结果加入饲养细胞的PBMCs在添加了细胞因子的X-VIVO15TM无血清培养基中可培养21 d,30 Gy照射后的AlloMNCs作为饲养细胞时细胞扩增最明显,在第21天时扩增了270.3±10.4倍,CD56＋CD3-NK细胞纯度由培养前的（9.7±2.4）%提高到扩增后的（56.5±7.8）%,与无饲养细胞的对照组相比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。细胞杀伤实验表明,当效靶比为10∶1时,添加30Gy照射后的AlloMNCs刺激扩增的NK细胞对K562和HO8910的杀伤率平均达到59.7%、63.2%,分别与对照组的28.3%、32.2%相比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 30 Gy照射后的AlloMNCs可作为饲养细胞在体外促进NK细胞的增殖,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增NK细胞的方法。
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