作者：杨明珍 李鹏 张竹君 易维京 李淑慧 赵利...单克隆抗体表位
摘要：目的制备抗淋巴样增强因子-1（LEF-1）羧基端86个氨基酸（Lct86）特异性单克隆抗体，并初步明确其表位，为进一步研究LEF-1 C端特异序列的功能奠定基础。方法从Jurkat细胞株中扩增LEF-1 C端特异序列cDNA，并克隆入PQE40、pET32a原核表达载体；分别转化入M15、B121（DE3）感受态菌，IFIG诱导表达；纯化PQE40-Lct86融合蛋白作为免疫原免疫Balb／c小鼠制备单克隆抗体，以pE332a-Lct86融合蛋白鉴定单克隆抗体特异性。LEF-1 C端特异序列不同长度的基因片段定向克隆入PQE40，鉴定各片段的表达，利用Western blotting初步鉴定单克隆抗体的表位。结果成功构建了PQE40-Lct86、pE332a-Lct86重组原核表达载体；纯化获得PQE40-Lct86融合蛋白；得到一株特异性的抗LEF-1 C端单克隆抗体TMAb1，证实其表位位于437aa～454aa。结论成功制备了一株特异性的抗LEF-1 C端单克隆抗体TMAb1，并鉴定其抗原识别表位位于437aa～454aa，为进一步研究LEF-1 C端的功能奠定基础。
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