作者:毛旭虎; 马颖; 陈洪章; 邹全明志贺样毒素单链抗体分泌表达
摘要:目的 构建重组志贺样毒素ⅡA亚单位(SLT2A)单链抗体基因(scFv),并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法 通过连接肽(Gly4Ser),将已成功扩增的抗SLT2A单克隆抗体(mAb)5F3的VL和Va连接成scFv基因VH-Linker-VL并在Va基因5′端和VL基因3′端引入Sfi Ⅰ和Not Ⅰ的酶切位点,克隆至经改造的分泌性表达载体pCANTAB6His中,转化Ecoli HB2151,IPTG诱导表达。表达产物经亲和层析纯化后,SDS-PAGE和Westem blot分析鉴定。结果 经限制性酶切鉴定及DNA测序分析证实,基因构建正确。SDS-PAGE和Westem blot分析表明scFv基因在大肠杆菌中得到表达,表达产物的相对分子质量为27000,与理论预期值相符,且可与相应抗原特异结合。结论 成功地实现了抗SLT2A scFv基因的原核分泌表达,为探讨0157菌感染的机制及防治研究奠定了基础。
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