作者：卢小玲; 吴雄文; 翁秀芳; 李青; 梁智辉; ...生物素化bira酶
摘要：目的 制备生物素化的HLA-A＊2402-抗原肽复合物。方法 将原核高效表达的sHLA-A＊2402-BSP融合蛋白及β2m和HLA-A＊2402限制性抗原肽EB病毒BRLF1蛋白中的九肽NH2-TYPVLEEMF-COOH进行稀释、复性、折叠，形成HLA—A＊2402-抗原肽复合物单体，并在BirA酶作用下进行生物素化，使生物素结合到HLA-A＊2402-抗原肽复合物中H链C端的BSP序列上形成生物素化的sHLA—A＊2402-抗原肽复合物单体。利用特异性单克隆克体（W6／32和兔抗人β2微球蛋白抗体）及链霉亲合素进行ELISA和Westem blot，检测稀释复性和生物素化的折叠产物。结果 折叠复合物中，主要含有HLA—A＊2402-肽复合物单体及β2两种成分，其中HLA-A＊2402-肽复合物单体可生物素化。结论 成功制备出生物素化的HLA—A＊2402-抗原肽复合物单体，为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础。
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