作者：白志军; 陈政良甘露聚糖结合凝集素天然免疫真核表达哺乳动物细胞
摘要：目的比较人甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因在不同哺乳细胞株中的表达效率.方法应用PCR从含有中国人野生型MBL cDNA的质粒pGEM-MBL中扩增目的基因片段,将其克隆至pcDNA3.1+表达载体,经酶切及测序鉴定后,以电穿孔法转染CHO、HEPG2和HEK293细胞,以RT-PCR、ELISA分析其在3株细胞中的表达情况.结果从pGEM-MBL中扩增得到约750 bp的MBL DN段,构建成重组表达载体pcDNA3.1+-MBL,经酶切出现750 bp片段,测序鉴定与预期的完全一致.将其转染进细胞后,经G418选择转染子并克隆化培养,RT-PCR和ELISA分析显示,在CHO和HEK293细胞中及培养上清液中分别有较高的MBL mRNA和蛋白表达,而HEPG2细胞表达较低.结论人MBL在CHO和HEK293细胞中的表达效率较高,为今后在哺乳动物细胞中高效表达人MBL积累了经验.
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