作者:陈家越荧光增强法hcv解旋酶dna
摘要:研究单标记荧光共振能量转移法用于检测丙肝解螺旋酶.设计一段DNA双螺旋片段,其中一条DNA链的3’末端标记荧光基团,另一条链的5’末端以多个G碱基作为猝灭基团.当解旋酶不存在时,DNA双螺旋结构稳定,由于荧光共振能量转移作用,此时体系荧光较弱.加入解旋酶后,由于酶对双螺旋DNA有特异性解旋作用,使得双链DNA解离,导致末端标记的荧光基团与另一条链的G碱基远离,从而使体系的荧光增强.最佳实验条件下,解螺旋酶的浓度在1nmol·L-1 -0.5μmol·L-1范围内与503nmol·L-1处的荧光强度呈良好的线性关系,检测限达到0.3nM,该体系可以用于丙肝解旋酶的测定.
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