作者：刘志刚; 丁伟峰; 孙娜; 张欣; 李娴; 谢世...达摩风蝶单细胞克隆昆虫细胞系口一半乳糖苷酶分泌型碱性磷酸酶重组杆状病毒
摘要：[目的]前期研究中，项目组从达摩风蝶细胞系RIRI—PaDe-2中分离培养出单细胞克隆株RIRI—PaDe-2一C6，通过感染野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）发现克隆株RIRI—PaDe一2一C6对病毒敏感性高于原细胞系RIRI—PaDe一2。本研究将对达摩风蝶单细胞克隆株RIRI—PaDe一2一C6的生物学特性和外源蛋白表达特性进行研究，并与原细胞系RIRI—PaDe一2进行比较，评价其用于外源蛋白表达的可行性。[方法]使用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统构建重组口一半乳糖苷酶杆状病毒（AcMNPV—Gal）和重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒（AcMNPV—SEAP），分别侵染RIRI—PaDe-2和RIRI-PaDe-2-C6。在感染后的24、48、72、96、120、144、168h检测2种重组蛋白的表达量，并对2个细胞系的形态学、生长曲线、倍增时间及核型进行分析和比较。[结果]表明：RIRI—PaDe-2和RIRI—PaDe-2一C6均可表达卢一半乳糖苷酶（β一Gal）和分泌型碱性磷酸酶（SEAP），单细胞克隆株RIRI—PaDe-2一C6对重组β一Gal的表达水平显著高于原细胞系RIRI—PaDe一2（P〈0．05），在接种AcMNPV—Gal后96h表达量达到最高。RIRI—PaDe-2一C6对重组SEAP的表达水平与RIRI—PaDe-2无显著差异（P〉0．05）。显微观察发现，RIRI—PaDe-2一C6的细胞类型全部为俊形，比原细胞系RIRI—PaDe-2的细胞组成更加单一。RIRI—PaDe一2一C6的群体倍增时间为94．94h，比原细胞系RIRI—PaDe一2的倍增时间（67．42h）长。核型分析显示，RIRI—PaDe-2一C6的染色体数量呈正态分布，数目为21～82条，与RIRI—PaDe一2的染色体数目分布范围（48～97条）存在显著差异（P〈0．05）。[结论]通过单细胞克隆方法获得的克隆株RIRI—PaDe-2一C6无论在外源蛋白表达以及基础生物学特性方面均有别于原细胞系RIRI—PaDe-2。
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