作者：肖霞 张立峰 齐力旺 韩素英落叶松体细胞胚胎转基因mir396生长调节因子发芽率生根率叶片数目
摘要：[目的]探讨miR396在落叶松体细胞胚胎发生中的功能。以期该研究能为解决体胚发育中子叶畸形胚与生根率低的问题提供新的视角,同时也为进一步揭示体胚发育的分子调控网络做基础铺垫。[方法]构建pre-miR396超表达载体,通过农杆菌介导侵染,将pre-miR396转入落叶松胚性细胞中,筛选稳定抗性细胞系。在DNA与RNA水平上,对抗性细胞系进行的鉴定、检测,同时统计比对其与野生细胞系间发芽率、叶片数目以及生根率的差异。[结果]在抗性细胞系基因组中,扩增出HTP与miR396的特异性片段,且无农杆菌Virg基因片段。RNA表达水平上,抗性系pre-miR396与miR396表达皆增加,而靶基因La GRFs的表达量下调。统计表明抗性系胚的发芽率、生根率、叶片数目畸形率分别为70.60%、0.60%、37%,而野生型分别为92.50%、10.55%、4%,抗性系胚的发芽率、生根率显著降低（Sig.=0.000）,叶片数目畸形率显著增加（Sig.=0.000）。[结论]miR396在落叶松体细胞胚胎发生过程中,可能通过负调节靶基因La GRFs的表达或者通过La GRFs影响与它相互作用的基因,参与体胚子叶原基细胞代谢,从而影响了子叶与叶片的发育;通过负调节La GRFs或者其它与根部发育相关的靶基因,影响了根端分生区细胞的活动,参与调控根的发育。
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