作者：刘玉香 宋晓琛 江香梅润楠issr体系优化引物筛选
摘要：以润楠基因组总DNA为材料,利用单因素试验设计方法,对影响ISSR-PCR扩增的模板DNA、Mg2＋、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶以及去离子甲酰胺等试验因子进行了优化试验,筛选出16条有效引物并确定了它们的退火温度,并检测了体系的重复性.优化后的反应体系为：20 μL PCR反应体积中,10×PCR Buffer 2μL,2.0mmol/L Mg2＋ 1.6 μL,0.2 mmol/L dNTPs 2 μL,0.4 mmol/L 引物0.8 μL,0.5U Taq DNA聚合酶0.1 μL,40 ng DNA模板1.0μL,1.5％去离子甲酰胺0.3 μL,ddH2O 12.2 μL.扩增程序为：94℃预变性5 min,94℃变性30 s,据不同引物的退火温度复性45 s,72℃延伸90 s,反应37个循环,最后在72℃延伸7 min.润楠ISSR-PCR反应体系的建立为利用ISSR分子标记技术研究润楠的遗传多样性奠定了良好的基础.
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