作者：裴建军; 董萍; 徐菲; 赵东霞; 赵林果; 丁...槲皮素异鼠李素重组菌转化条件
摘要：异鼠李素是一种黄酮类化合物,广泛存在于银杏、沙棘、旱柳和枸杞等植物中,具有多种药理作用。植物来源的O-甲基化酶能对槲皮素羟基进行甲基化,因而构建重组菌高效表达O-甲基化酶可应用于催化槲皮素生成异鼠李素。笔者对大豆来源的O-甲基化酶SOMT-9编码基因进行了密码子优化,其密码子适应指数（CAI）从优化前的0.59,提高为0.87。将优化后的基因SysOMT-9插入表达载体pGEX-2T,构建获得重组质粒pGEX-SysOMT。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,通过改变诱导温度及诱导剂浓度,实现了SOMT-9可溶性表达。在此基础上对其转化条件进行了优化,其最佳转化条件为：起始菌量OD600为10,转化温度为30℃,诱导剂IPTG用量为0.01mmol/L,助溶剂DMSO质量分数为1%,1%甘油,40μmol/L的S-腺苷基甲硫氨酸和1mmol/L槲皮素。在此条件下,重组菌在12h内,可将127mg/L的槲皮素,转化生成133mg/L异鼠李素,摩尔转化率为42%,是优化前的7.8倍。
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