作者：刘璐; 徐晓婷; 秦磊; 金晓红; 顾冬梅; 王...brca2基因启动子克隆基因调控
摘要：目的构建BRCA2基因启动子的荧光素酶报告质粒，为BRCA2基因调控研究提供基础。方法采用高保真Taq聚合酶，从正常人外周血中扩增出BRCA2启动子并将其插入质粒中。通过基于PCR的定点突变方法在多态性位点rs3092989（-254A／G）获得含-254G等位基因的序列。亚克隆BRCA2启动子片段至pGL3-basic报告基因载体中，构建含BRCA2启动子的重组报告质粒。转染HeLa细胞，评价启动子活性以及-254A／G多态性位点对活性的影响。结果酶切和直接测序法证实所构建质粒含有pGL3-basic及BRCA2基因启动子序列，扩增的含-254A和-254G的BRCA2启动子序列正确。构建的报告基因具有启动子活性，与pGL3-basic质粒相比较，BRCA2启动子的相对荧光单位增加了413倍。rs3092989（-254A／G）多态位点未明显影响启动子活性。结论BRCA2转录起始位点上游序列具有较强的启动子活性。成功克隆BRCA2启动子并引入相关突变，可为后续的基因转录调控研究奠定基础。
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