作者：关慧芳; 丁菁; 张倩; 黄华; 姜君财; 陆德...心肌细胞内皮型一氧化氮合酶pp2a
摘要：目的：初步探讨缺氧/复氧（H/R）损伤过程心肌细胞株H9C2中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）Ser633磷酸化水平的变化及其可能的调控机制。方法：采用缺氧4h培养后恢复常氧条件培养12、16或24h造成H9C2细胞H/R损伤。选取缺氧4h/复氧12h（H4/R12）进行后续实验。（1）H/R后用钙离子泵抑制剂毒胡萝卜素（thapsigargin,TG）,1.0×10（-6） mol/L处理细胞1h;用PI3K/Akt抑制剂LY294002（5.0×10（-5） mol/L）预处理1h,再进行H/R及TG处理1h。（2）用PP2A/PP1抑制剂冈田酸Okadaic acid（OA）低剂量（5×10 （-8） mol/L）、高剂量（1×10（-6） mol/L）预处理细胞30 min,再进行H/R。用Western blot检测eNOS总蛋白及eNOS Ser633磷酸化水平,化学比色法检测培养基中一氧化氮（NO）含量。结果：（1）H/R损伤后心肌细胞eNOS Ser633磷酸化水平降低（P〈0.05）;TG明显上调eNOS Ser633磷酸化水平（P〈0.05）,LY294002预处理可抑制TG的上调作用（P〈0.05）;低剂量OA、高剂量OA预处理均可上调H/R损伤后eNOS Ser633磷酸化水平（P〈0.05）,且高、低剂量组间无明显差异。（2）H/R损伤后培养基中NO含量减少（P〈0.05）;TG、低剂量OA、高剂量OA处理均可增加H/R损伤后培养基中NO含量（P〈0.05）。结论：H/R损伤可明显降低H9C2细胞中eNOS Ser633水平,这可能是由于H/R过程中既有PI3K/Akt通路被抑制,又有PP2A活性增强所致。
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