作者：程力维; 刘绪; 何龙人亚甲基四氢叶酸还原酶基因基因多态性
摘要：目的利用PCR引物的错配扩增和荧光定量PCR技术,建立一种针对人亚甲基四氢叶酸还原酶（methylene tetrahydrofolate reductase,MTHFR）基因多态性的快速荧光扩增检测方法。方法收集已经测序验证的MTHFR基因C677T,A1 298C位点的野生型、杂合型和突变型样本,并据此构建野生型和突变型质粒;根据野生型MTHFR基因序列设计ARMS（扩增阻碍突变系统）引物和Taq Man探针并筛选出最合适的突变检测体系,与已知突变信息的214例样本进行比较,以验证该检测体系的可行性。结果建立的Taq Man-ARMS法性能评估优异,样本的最低检测限为10 copies/μL,样本间交叉检测无核酸扩增,体系检测阴性对照无核酸扩增;重复性及实验室内精密度结果良好,MTHFR-667位点和1 298位点重复性检测的标准差介于0.11～0.44,纯合和杂合样本的变异系数（CV）均〈4.52%。214例临床样本用该法检测结果与测序法的一致性为100%。结论基于Taq Man-ARMS法检测MTHFR的基因多态性方法简单,快捷,精确,适合用于临床样本快速诊断。
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