作者：魏丽勤; 柳波; 李岩动蛋白高尔基体花粉管烟草相关蛋白免疫荧光标记透射电子显微多肽序列镜下观察pcr方法
摘要：有关研究表明, 中央马达动蛋白AtKinesin-13A在拟南芥不同细胞中与高尔基体结合. 用简并引物, 通过RT-PCR方法从烟草中克隆到一个2067 bp的基因片段, 其编码的多肽序列与拟南芥中AtKinesin-13A相应序列的相似性为77.33%, 其原核表达产物可与AtKinesin-13A抗体进行特异反应. 进一步研究发现, AtKinesin-13A抗体可以与烟草不同组织提取物中一个120 kD的多肽进行反应. 这些结果表明, 烟草中存在AtKinesin-13A的同源蛋白NtKinesin-13A, 其分子量约为120 kD. 经免疫荧光标记, 在共焦激光扫描显微镜下观察发现, NtKinesin-13A在烟草花粉管中呈颗粒状分布, 且与高尔基体标记蛋白58K共分布, 说明烟草花粉管中NtKinesin-13A也存在于高尔基体上. 经免疫金标, 在透射电子显微镜下观察, 发现烟草花粉管中的NtKinesin-13A定位在高尔基体附近的囊泡膜上. 以上结果表明, 烟草中NtKinesin-13A可能参与了花粉管中高尔基体运动的调控或与高尔基体囊泡的分泌有关.
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