作者：王玉华; 张秀海; 吴忠义; 杨清; 陈国强; ...羟基脂肪酸叶绿体基因工程长链southern转基因烟草植株电子显微镜观察叶绿体转化生物合成途径基因枪转化法叶绿体基因组基因编码表达载体phas微生物聚酯磷酸转移酶气相色谱法叶片叶绿体筛选标记氨基糖苷
摘要：中长链羟基脂肪酸聚酯(medium-chain-length-PHAs,mcl-PHAs)属于微生物聚酯.PHA合酶(PHAsynthase,由phaC基因编码)和3-羟酰基-酰基转移蛋白-辅酶A转移酶(3-hydroxyacyl-acyl carrierprotein-coenzyme Atransferase,由phaG基因编码)是mcl-PHAs生物合成途径中的关键酶.以aadA(氨基糖苷-3'-磷酸转移酶)基因做筛选标记,分别构建了含phaC2基因的单价叶绿体转化表达载体pTC2以及同时嵌合phaC和phaG基因的双价叶绿体转化表达载体pTGC.通过PDSl000/He基因枪转化法转化烟草,获得具有壮观霉素抗性的叶绿体型转基因烟草植株,PCR和Southern Blot结果表明,外源基因确已整合进烟草叶绿体基因组中且基本达到同质化.气相色谱法检测转基因株系中的mcl-PHAs含量最高达4.8 mg/g干重,合成的PHAs单体主要成分为3-羟基辛酸(3-hydroxyoctanoate,3-HO)和3-羟基癸酸(3-dydroxydecanoate,3-HD).透射电子显微镜观察到转基因烟草叶片叶绿体中确有PHAs颗粒累积.
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