作者：李郁; 姚西英; 杨勇; 陈江浩; 张思河; 宋...刺突蛋白rbd噬菌体抗体fab
摘要：为表达SARS-CoV刺突蛋白S(Spike)受体结合区(RBD)并从中筛选高潜在中和性人源抗体,我们用原核表达并纯化的SARS-CoV S RBD进行抗体库的筛选.从多个曾患SARS的健康人血中获得淋巴细胞,PCR扩增全部抗体基因,插入Pcomb3x载体中,构建抗SARS病毒人源噬菌体抗体库.利用噬菌体表面呈现技术,从中筛选结合SARS-CoV S RBD的人源抗体并用ELISA及Western blot鉴定阳性克隆,竞争ELISA检测人源抗体阻断SARS-CoV S RBD与其受体ACE2的结合情况.结果为构建了库容量6.2×107的免疫Fab噬菌体抗体库,重组率为75%,从中筛选获得9株特异抗SARS-CoV S RBD的人源Fab抗体,ELiSA及Western blot检测均为阳性.其中有一株能阻断SARS-CoV S RBD与其受体ACE2的结合.本实验结果表明:人源抗SARS-CoV S RBD基因工程抗体的获得,一方面将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径,同时也提示SARS-CoV亚单位疫苗可以用于SARS疾病的预防.
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