作者：孙静华; 牛玉梅; 樊明文远缘链球菌葡糖基转移酶原核表达
摘要：目的：在大肠杆菌中表达重组远缘链球菌葡糖基转移酶（glucosyltransferase，GTF）的催化活性区（catalytic region，CAT）蛋白并制备其多克隆抗体。方法：扩增远缘链球菌OMZ176基因组的CAT区的基因片段，克隆入pQE31载体诱导表达，鉴定表达产物。重组蛋白纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体，ELISA测定抗体的效价，West-ernblotting检测抗体的特异性和亲和性。结果：重组质粒成功在大肠杆菌中表达，经抗Histag单克隆抗体免疫印迹法检测，有阳性条带出现，证实重组蛋白有抗原特异性。ELISA测定免疫小鼠所得抗CAT多克隆抗体效价可达到1：5000。Western blotting检测证明该抗体有较好的针对CAT蛋白的专一性。结论：GTF区CAT基因原核表达质粒构建成功，表达的融合蛋白具有良好的抗原性。抗CAT多克隆抗体特异性和效价良好，能够满足针对CAT免疫印迹和细胞免疫组化检测等实验要求，为深入研究同时包含变形链球菌和远缘链球菌两种致龋菌的主要抗原的新型防龋DNA疫苗奠定了必要的物质基础。
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