作者：汤晓飞; 高文涛; 孙宏晨; 张泽兵; 徐辉; ...大鼠颌下腺肌上皮细胞原代培养胶原酶消化法透射电镜免疫组织化学
摘要：目的:转染质粒pSV2neo、pSV3neo,使大鼠颌下腺上皮细胞永生化, 进而建立大鼠颌下腺肌上皮细胞系.方法:采用改良磷酸钙沉淀法, 将制备的质粒pSV2neo、pSV3neo 转染大鼠颌下腺上皮细胞,G418 筛选,Southern 印迹杂交、透射电镜、免疫组化及软琼脂培养检测所筛选阳性细胞的性质.结果:经质粒pSV2neo、pSV3neo转染分离的大鼠颌下腺上皮细胞仍保留上皮细胞的形态,生存期延长.经pSV3neo转染的上皮细胞,Southern 印迹杂交证明整合有SV40 T抗原(LT);免疫组化和透射电镜观察显示存在有大量的肌上皮细胞和少量的腺泡细胞;软琼脂培养无克隆形成.结论:经质粒pSV3neo转染的上皮细胞具有永生化倾向.
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