作者：李婧; 程梁; 郭吕华; 李彤; 杨沫扬; 王俊...银杏叶提取物黄酮类化合物异鼠李素破骨细胞破骨分化
摘要：目的探讨银杏叶中异鼠李素(isorhamnetin,ISO)对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响及其可能的相关分子机制。方法在核因子κB受体活化因子配基(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞的同时,加入不同浓度的ISO(1~10μM),研究其对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响,通过CCK8法检测及评估各作用浓度ISO的细胞毒性,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistantacid phosphatase staining,TRAP)染色及骨片吸收效果判定其对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响。实时定量PCR检测破骨细胞分化过程的标志性基因:TRAP、组织蛋白酶K(cathepsinK,Ctsk)、金属基质蛋白酶9(matrix metallo protein,MMP-9);分化相关转录因子:原癌基因c?Fos(proto-oncogene protein,c-Fos)、核转录因子激活的T细胞1(nuclear factor of activated T-cell scytoplasmic 1,NFATc1)的表达及破骨细胞分化下游因子NF?κBp65信号通路的磷酸化水平。结果不同浓度的ISO(1~10μM)对RAW264.7细胞无细胞毒性,并且能抑制TRAP活性,减少骨吸收陷窝数量,在浓度为10μM时最为显著;ISO能显著降低TRAP、Ctsk、MMP-9、c-Fos、NFATc1及NF?κBp65的mRNA表达。结论ISO对RAW264.7细胞向破骨细胞的分化具有抑制作用,其机制可能与经典NF-κB通路的抑制有关。
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