作者：杨彦; 陈陵; 崔明; 段体德肝素酶荧光真核表达载体转染
摘要：目的 构建正、反义人肝素酶绿色荧光蛋白真核共表达载体，并转染人胰腺癌SWl990细胞．方法 用EcoRI从pcDNA3-Hpa质粒上切下约1．7kb的人肝素酶全长cDN段，然后连人plRES2-EGFP质粒的EcoRI酶切位点上，经BamH I酶切鉴定出正义和反义表达载体，并进一步测序确认．用脂质体法将肝素酶正、反义真核表达载体转染人胰腺癌SW1990细胞，24h后荧光倒置显微镜下检测转染结果．结果 经BamHI酶切后，正义质粒形成5．3kb和1．7kb两条DN段，反义重组质粒为6．5kb和0．5kb两条DN段，与理论计算值一致；测序结果进一步确认了方向的正确性．转染成功的胰腺癌细胞在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光．结论 成功构建了人肝索酶正、反义真核表达载体，并成功转染人胰腺癌细胞株SWl990，为进一步研究正、反义肝素酶基因转染对胰腺癌细胞的转移能力的影响奠定基础．
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