作者：王江; 段君君; 张小玉; 贾霄; 汪小波; 何...sox9慢病毒表达载体lncap细胞脂质体转染
摘要：目的构建SOX9基因慢病毒表达载体,建立稳定表达SOX9的LNCaP细胞株.方法PCR扩增SOX9基因,将其克隆到慢病毒表达载体pLVX-IRES-Puro中,双酶切和测序鉴定重组质粒.用HEK293细胞包装重组病毒颗粒并感染LNcap细胞,经puromycin筛选获得稳定转染细胞株.qRT-PCR和Western Blot分别检测SOX9 mRNA水平及蛋白表达.结果经双酶切和测序鉴定证实目的片段已插入到慢病毒表达载体上.重组质粒转入LNCaP细胞后经puromycin抗性筛获得稳定表达的细胞株,qRT-PCR检测到SOX9基因在转录水平的表达,Western blot分析显示SOX9蛋白高表达.结论慢病毒表达载体pLVX-IRES-FLAG-SOX9构建成功,实现了SOX9在LNcap细胞中的外源性表达.
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