作者：邹少林; 丁先锋; 郭江峰flag融合标签蛋白纯化亲和常数
摘要：构建了三种融合标签FLAG1（DYKDDDDK）、FLAG2（DYKDYKYK）和FLAG3（DYKGGGYK）的原核表达质粒pGEX-2t-His-NSH2-FLAG,以大肠杆菌BL21（DE3）为宿主,表达并纯化重组蛋白GST-His-NSH2-FLAG。生物信息学分析表明FLAG1的亲水性和抗原性较强,FLAG2次之,FLAG3最弱。Western blotting分析表明单抗M2能够识别此三种FLAG融合蛋白。非竞争性酶免疫法测得FLAG1、FLAG2和FLAG3结合单抗M2的亲和常数分别为0.077μM,0.102μM和0.126μM。相关工作为在多肽芯片上应用FLAG标签进行蛋白质相互作用的检测奠定了一定的基础。
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