作者：陈琛; 卞晶晶; 刘晓萍; 张静; 于忠杰; 杨...脂多糖类丁酮类巨噬细胞细胞增殖基因表达
摘要：目的观察脂多糖（LPS）、4-（甲基亚硝氨基）-3-吡啶-1-丁酮（NNK）对小鼠巨噬细胞增殖及相关基因表达的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞Raw264.7细胞,检测不同浓度的LPS及NNK刺激后Raw264.7细胞C-myc mRNA的表达情况,选择药物最佳浓度。用所选浓度的LPS、NNK及LPS＋NNK孵育Raw264.7细胞不同时间,利用细胞计数仪检测细胞增殖能力,采用实时定量PCR方法检测C-myc、核转录因子-κB（NF-κB）、精氨酸酶（Arginase）、一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1α及IL-6mRNA表达,应用酶联免疫试剂盒检测炎性递质TNF-α及IL-6的含量。结果选择浓度为10μmol/L NNK与1mg/L LPS进一步实验。NNK孵育Raw264.7细胞24h,其细胞增殖和各基因表达及IL-6、TNF-α蛋白表达与对照组比较差异无显著性。LPS和LPS＋NNK孵育Raw264.7细胞24h,其细胞增殖活性显著降低;C-myc、NF-κB、Arginase、iNOS、IL-1α、IL-6mRNA及IL-6、TNF-α蛋白表达显著升高（F=19.4～5 895.0,t=4.04～97.53,P〈0.05）。NNK对LPS刺激的Raw264.7细胞C-myc mRNA、TNF-α蛋白的表达升高具有拮抗作用;对NF-κB、IL-1αmRNA的表达升高具有协同作用。结论 LPS可抑制Raw264.7细胞的增殖,并促进Raw264.7细胞活化;NNK单独孵育对巨噬细胞的增殖和相关基因表达无明显影响,但可以强化LPS诱导的NF-κB、IL-1α基因高表达,促使巨噬细胞向M1型活化。
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