作者：张正; 刘丹平; 蒲勤; 郭韬; 张男腺病毒穿梭载体
摘要：目的构建腺病毒穿梭质粒pShuttle CMV-BMP2+-IRES-hrGFP-1,为构建表达具有抗原表位标记的骨形态发生蛋白2(bone morpbogenetic protein 2,BMP-2),并同时表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)报告分子的腺病毒真核细胞表达载体打下基础.方法对目的基因供体质粒pcDNA3-BMP2携带的BMP2基因测序和序列内部存在的限制性内切酶识别位点进行分析,利用PCR(polymeras chain reaction,PCR)技术对pcDNA3-BMP2携带的BMP2基因突变,以去除翻译终止密码子后的基因序列并添加新的酶切识别位点Xho Ⅰ.测序检测突变情况,将突变后的BMP2基因(BMP2+基因)定向连入腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV-IRES-hrGFP-1,通过限制性内切酶酶切图谱分析鉴定获得的重组质粒.结果重组质粒经双酶切鉴定图谱正确.结论成功构建了pShuttle CMV-BMP2+-IRES-hrGFP-1.
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