H9N2亚型禽流感病毒M2e和HA2串联蛋白在原核系统中的表达

作者：张民秀; 谢芝勋; 黄莉; 谢志勤; 刘加波; ...h9n2亚型禽流感病毒

摘要：构建H9N2亚型禽流感病毒M2蛋白胞外区（M2e）和HA蛋白颈部区（HA2）串联体，并在原核系统中进行该重组蛋白的表达，以便研究重组蛋白的反应原性。以含有全长H9N2亚型AIVHA基因的质粒为模板，经过PCR扩增得到HA2基因；利用BglⅡ和BamHⅠ互为同尾酶的链接方法，构建3个拷贝M2e和HA2基因的串联体，并将串联体连接入原核表达载体pGEX-4T-1构成3M2e＋HA2-pGEX重组质粒；同时构建单独表达HA2蛋白的原核表达重组质粒HA2-pGEX；DNA测序鉴定这两种重组质粒正确后，转化至表达宿主菌中；重组蛋白经不同IPTG浓度进行诱导；SDS—PAGE电泳鉴定重组蛋白大小，并进行可溶性分析和纯化；采用Western blotting法对两种重组蛋白的反应原性进行分析。结果显示，3M2e＋HA2-pGEX和HA2-pGEX重组蛋白分别经终浓度为0．5mmol／L和0．25mmol／L的IPTG诱导，37℃培养4h时，表达量最高；3M2e＋HA2-pGEX和HA2-pGEX重组蛋白大小分别为59．4ku和49．8ku；对重组蛋白进行可溶性分析显示，两种重组蛋白均以包涵体形式存在；Western blotting分析显示，3M2e＋HA2-pGEX和HA2-pGEX重组蛋白与免疫H9N2禽流感病毒后获得的阳性血清具有良好的特异性反应，这些结果为进一步研究HA2、3M2e＋HA2蛋白的免疫原性和开发广谱H9N2亚型禽流感疫苗提供了理论依据。

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