作者：冯岚; 曹鹏博; 周钢桥癌肝细胞血清应答因子细胞迁移细胞运动上皮间充质转化印迹法蛋白质
摘要：目的探讨血清应答因子(SRF)对肝癌细胞系Bel-7402和SMMC-7721增殖与迁移能力的影响及其作用机制。方法在Bel-7402和SMMC-7721中瞬时转染SRF重组质粒过表达SRF;通过慢病毒包装将特异敲低SRF的短发夹RNA(shRNA)重组质粒转染Bel-7402和SMMC-7721细胞系,筛选稳定敲低SRF的细胞系;蛋白质免疫印迹(WB)法检测细胞中SRF蛋白的表达水平,验证SRF的过表达或敲低效果;CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测SRF对肝癌细胞系增殖能力的影响;Transwell法检测SRF对肝癌细胞系迁移能力的影响;实时定量PCR法检测受SRF调控的下游靶基因的mRNA表达水平;采用Log-rank检验比较SRF高表达组和低表达组肝癌患者的生存期差异。结果过表达或敲低SRF对肝癌细胞的增殖能力无明显影响;过表达SRF可显著促进Bel-7402和SMMC-7721的迁移能力,而敲低SRF则显著抑制其迁移能力;过表达SRF可显著促进肝癌细胞上皮间充质转化(EMT)过程,而敲低SRF则显著抑制其EMT过程;临床相关性分析显示,SRF在肝癌组织中上调表达,且与肝癌患者的不良预后显著相关。结论SRF可通过促进细胞EMT而增加肝癌细胞的迁移能力,从而发挥促癌基因的功能。
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